طراحی پپتید آنتی ژن چند اپیتوپی بر اساس ژن ‭EgA31 ‬تحریک کننده سلول های ‭T ‬بر علیه اکینوکوک و ارزیابی پاسخ ایمنی در مدل حیوانی

در این تحقیق شناسایی اپیتوپ های غالب تحریک کننده سیستم ایمنی اختصاصی سلول های ‭T ‬و بواسطه آن طراحی کاست ژنی وابسته به پروتیین ‭EgA‬‮‭31‬اکینوکوکوس گرانولوزوس و بررسی پاسخ ایمنی آن انجام گرفت. اپیتوپ ها با نرم افزار های ‭Propred ‬و ‭IEDB‬با بهترین قدرت اتصال به مولکول های ‭MHC ‬پیش بینی شدند. پس از سنتز ‭DNA‬، قطعه مورد نظر آنتی ژن ‭EgA‬‮‭31‬ با ‭PCR ‬تکثیر و در دو وکتور‭pGEX‬4T1 و‭pEGFP-N‬1 کلون شد. پروتیینهای کایمریک در سلول‭E.coli ‬متصل با ‭GST ‬بیان شدند. بیان ‭GFP-ChEgA‬‮‭31‬ در سلول های ‭CHO ‬با فلورسنت میکروسکوپی و ‭RT-PCR ‬تایید شد. بیان پروتیین بیان شده با وسترن بلاتینگ تایید شد، سپس با روش افینیتی خالص سازی و به موش های 6‭/C‬‮‭57‬‭BL ‬همراه با اجوانت فروند تزریق شد. سلول های ‭splenocyte ‬طحال به مدت ‮‭72‬ ساعت در محیط ‭DMEM ‬در حضور آنتی ژن، کشت داده شدند. نتایج الایزا نشان داد که‭IFN- ‬در سلول های طحال موشهای ایمن شده با آنتی ژن گروه ‭GST-ChEgA‬‮‭31‬ حدودا ‮‭1300-634‬ پیکوگرم و در گروه ‭GFP-ChEgA‬‮‭31‬ نیز ‮‭1300‬پیکوگرم در میلی لیتر بیان شد، که نشان داد پروتیین چند اپیتوپی بخوبی سیستم ایمنی سلولی را تحریک کرده است. از طرفی افزایشی در میزان ‭IL‬،4 ‭IL‬‮‭10‬مشاهده نشد. موشهای ایمن شده، با تعداد پانصد پروتواسکولکس زنده چالنج شدند که بعد از سه ماه کیست ها شمارش شدند. مشاهدات نشان داد که آنتی ژن ‭GST-ChEgA‬‮‭31‬ تا ‮‭50‬ % و در گروه تزریق شده با ‭pEGFP-ChEgA‬‮‭31‬ حدودا ‮‭60‬ % مصونیت ایجاد نمودند، نتایج گواه این مطلب است که پیش بینی اپیتوپ ها بر اساس متد بیوانفورماتیک جهت طراحی آنتی ژن بر علیه اکینوکوکوس گرانولوزوس مفید بوده است.