تولید واکسن هپاتیت ب ‭(HBV) ‬در ریز جلبک ‭Dunaliella salina‬

کشاورزی مولکولی ، شامل تولید ترکیباتی باارزش دارویی در گیاهان می باشد. به خاطر محدودیتهای متعددی که در زمینه تولید انبوه، و فرآوری(استخراج و تخلیص) داروهای زیستی وجود دارد، ایجاد سیستم های بیانی جدید جهت پاسخ گویی به تقاضای رو به افزایش این داروها ضروری می باشد. امروزه ازسیستم های یوکاریوتی برای تولید پروتیین های باارزش استفاده میشود. برخی از خصوصیات ریزجلبک ‭Dunaliella salina ‬از قبیل کشت ساده، عدم نیاز به محیط های کشت گرانبها و فقدان دیواره سلولی باعث گردیده که جهت تولید فرآورده های دارویی مورد توجه فراوان قرار گیرد. دراین تحقیق قابلیت استفاده از این ریز جلبک برای تولید و بیان آنتی ژن سطحی ‭HBsAg ‬مورد بررسی قرار می گیرد. برای این منظور با استفاده از بانک های اطلاعاتی ناحیه کد کننده زیر واحد کوچک آنتی ژن سطحی ‭HBsAg ‬مشخص گردیده و ژن تولید کننده مربوطه جهت بیان مناسب در سیتم سلولی جلبک ‭D. salina ‬بهینه سازی و بصورت مصنوعی ساخته گردید. ترادف فوق در ابتدا به توسط هضم آنزیمی از وکتور همسانه ساز ‭pMK ‬جدا و با سایت های مشابه در وکتور ‭pBI‬‮‭121‬ جایگیری و جایگزین ژن ‭GUS ‬گردید. با توجه به حساسیت این ریز جلبک به علف کش باستا از ناقل بیانی ‭pCAMBIA‬‮‭3300‬ ، که حاوی ژن انتخابگر ‭bar ‬میباشد جهت بیان ژن خارجی در ریز جلبک استفاده گردید. جهت همسانه سازی در وکتور بیانی ‭pCAMBIA‬‮‭3300‬، ژن آنتی ژن سطحی به همراه پیشبرنده ‮‭35‬‭S ‬ویروس موزاییک کلم و خاتمه دهنده ‭NOS ‬با استفاده از هضم آنزیمی از ناقل اولیه جدا گردیده و اتصال مجدد قطعات مربوطه در ناقل بیانی جدید صورت پذیرفت. تایید مراحل مختلف همسانه سازی با استفاده از آزمون های ‭PCR ‬، هضم آنزیمی و تعیین ترادف صورت گرفت. انتقال ژن به جلبک ‭D. salina ‬با استفاده از روشهای همزدن با ذرات شیشه و بمباران با تفنگ ژنی صورت پذیرفت. جلبک های تراریخته بر روی محیط کشت انتخابی حاوی علف کش باستا قرار گرفته و پس از تکثیر سلول های تراریخته مقاوم به علف کش آزمون های تکمیلی مولکولی صورت پذیرفت. نتایج این آزمون ها حاکی از تولید سلول های جلبک تراریخته و همچنین حضور و بیان ژن ‭HBsAg ‬در سلول های جلبک تراریخته میباشد.. کلمات کلیدی: کشاورزی مولکولی، آنتی ژن سطحی هپاتیت B، ریز جلبک دونالیلا سالینا، همزدن با ذرات شیشه، بمباران با تفنگ ژنی