بیان ژن blf۱، Burkholderia pseudomallei در باکتری اشرشیاکلی و بررسی تیترآنتی بادی در موش

چکیده زمینه و هدف: باکتریB. pseudomallei  عامل بیماری میلوئیدوزیس در انسان است و از راه خوراکی، استنشاقی و یا از طریق خراش پوستی به بدن بیماران منتقل می شود. این عامل در طبقه بندی عوامل بیولوژیک در گروه  B قرار گرفته است.  BLF۱ به طور اختصاصی دآمیناسیون Gln۳۳۹ از eIF۴A را انجام می دهد. در این مطالعه، بیان ژن blf۱ باکتری B. pseudomallei در E. coli  و تولید آنتی بادی در موش بررسی گردید. روش بررسی: در این مطالعه تجربی، بیان ژن blf۱ باکتری B. pseudomallei در E. coli صورت گرفت. ژن صناعی در پلاسمید pUC۵۷ از شرکت ندای فن خریداری شد. پلاسمید pUC۵۷ حاوی ژن blf۱ با جایگاه های آنزیمی BamHI و SalI در وکتور بیانی pET۲۸a(+) زیرهمسانه سازی شد و به باکتری E. coli سویه BL۲۱(DE۳)، تراریخت (ترانسفورم) گردید. بیان ژن blf۱ تحت القایIPTG  انجام گرفت. یافته ها: در این مطالعه، ژن blf۱ کلون شده در وکتور بیانی pET۲۸a(+) به وسیله PCR و آنالیز آنزیمی تایید شد. همچنین پروتئین نوترکیب تولیدشده به وسیله SDS-PAGE و لکه گذاری وسترن تایید گردید. سپس آنتی بادی تولیدشده از سرم موش، جداسازی و به وسیله تست ELISA مورد تایید قرار گرفت. نتیجه گیری: با توجه به اینکه پروتئینBLF۱ توانایی توقف پروتئین سازی را دارد و آنتی بادی تولیدشده به وسیله تست ELISA مورد تایید قرار گرفته است، از پروتئین نوترکیب BLF۱ می توان برای درمان سرطان استفاده و به عنوان کاندیدای واکسن، علیه باکتری B. pseudomallei مطرح نمود.  

کلیدواژه ها:

Burkholderia pseudomallei ، BLF۱ toxin ، eIF۴A ، Melioidosis ، Subcloning. ، بورخولدریاسودومالئی ، سم بی ال اف ۱ ، ای ال اف ۴ آ ، میلوئیدوزیس ، زیرهمسانه سازی.