بیان ژن leoA هلیکوباکترپیلوری در سلول های تخمدان همستر چینی به روش RT-PCR

زمینه و هدف : عفونت هلیکوباکترپیلوری یکی از شایع ترین عفونت های مزمن باکتریایی در جهان به ویژه در کشورهای در حال توسعه است. ژن leoA نقش مهمی در بیماری زایی ایفا می کند و نقش اصلی این ژن افزایش ترشح سم توسط باکتری است. این مطالعه به منظور جداسازی و کلون سازی ژن leoA در وکتور بیانی pEGFP-C۲ و بررسی بیان آن به روش RT-PCR در سیستم یوکاریوتی انجام شد. روش بررسی : در این مطالعه توصیفی آزمایشگاهی ژن leoA از ژنوم هلیکوباکترپیلوری سویه استاندارد (ATCC ۴۳۵۰۴) به روش PCR تکثیر و جداسازی شد. سپس با روش کلون سازی T/A در ناقل pTZ درج گردید. ساب کلونینگ این ژن در وکتور بیانی pEGFP-C۲ با آنزیم لیگاز انجام شد. سپس سازواره نهایی pEGFP-C۲-leoA به روش الکتروپوریشن در سلول های تخمدان همستر چینی (Chinese hamster ovary: CHO) ترانسفرم گردید و بیان ژن leoA با روش SDS-PAGE و RT-PCR ارزیابی شد. یافته ها : نتایج PCR نشان دهنده تکثیر قطعه ۱۷۵۸ جفت بازی مربوط به ژن leoA بود. کلون سازی این ژن به ترتیب در وکتورهای pTZ و pEGFP-C۲ با موفقیت انجام شد. هضم آنزیمی با دو آنزیم KpnI وSacII و همچنین تعیین توالی، صحت کلون سازی ژن را تایید کرد. مشاهده محصول پروتئینی ژن leoA در سلول های CHO نشان دهنده بیان موفقیت آمیز ژن leoA هلیکوباکترپیلوری در سیستم یوکاریوتی بود. نتیجه گیری : سازواره نهایی pEGFP-C۲-leoA ، قدرت بیان موفق ژن leoA در سلول های جانوری را داشت.

کلیدواژه ها:

Helicobacter pylori ، LeoA gene ، Electroporation ، Recombinant vaccine ، هلیکوباکترپیلوری ، ژن leoA ، الکتروپوریشن ، واکسن نوترکیب