کلونینگ و بیان پروتئین سطحی HER۲ انسانی در سطح سلول های یوکاریوتی با استفاده از تکنیک های ترانسفکشن و ترانسداکشن به منظور تولید تومور در موش

مقدمه و هدف: سرطان پستان، پنجمین عامل شایع مرگ ومیر در سراسر دنیا بوده و در بین زنان شایع ترین سرطان کشنده است. HER۲ یک آنتی ژن سطحی است که در حدود ۳۰درصد سرطان های پستان، بیان افزایش یافته دارد. هدف این مطالعه کلونینگ ژن گیرنده HER۲ در وکتور بیانی +pCDNA۳.۱/Hygro و بیان این پروتئین در سلول های یوکاریوتی LL۲ و ایجاد مدل موشی سرطان پستان می باشد. مواد و روش ها: با تخلیص RNA، تکثیر ژن HER۲ و کلون کردن آن در وکتور +pCDNA۳.۱/Hygro، سازه بیان کننده ژن HER۲ ایجاد و ازطریق توالی یابی تایید گشت. در مرحله بعد، این سازه به سلول های سرطانی موشی LL۲ منتقل گردید. برای ایجاد رده سلولی پایدار، سلول های ترانسفکته به مدت یک ماه در محیط حاوی آنتی بیوتیک هیگرومایسین قرار داده شدند. سلول های حاصله، سرعت رشد کمی داشتند و منجر به ایجاد تومور نشدند. در کنار این کار، از سلول های LL۲ ترانسداکت شده با لنتی ویروس حاوی HER۲ استفاده کردیم که حدود ۱۰۶ سلول ترانسداکت شده به موش های C۵۷BL/۶ به روش زیرجلدی تزریق گردید. ده تا دوازده روز بعد از تزریق، تومور قابل لمس بود. نتایج: ژن HER۲ با موفقیت تکثیر و در وکتور پلاسمیدی +pCDNA۳.۱/Hygro کلون شد. تزریق سلول های LL۲ ترانسداکت و ترانسفکت شده با سازه حاوی HER۲ به موش، نشان داد که فقط سلول های LL۲ ترانسداکت شده با وکتور ویروسی pLEX HER۲ قادر به بیان پایدار HER۲ انسانی هستند. نتیجه گیری: با کلونینگ و بیان HER۲ در سلول های یوکاریوتی LL۲ می توان مدل سرطان پستان HER۲+ در موش ایجاد کرد.

کلیدواژه ها:

کلونینگ ، HER۲ ، رده سلولی موشی LL۲ ، تومور پستان ، مدل موشی ، ترانسفکشن