تشخیص و شناسایی گونه های کریپتوسپوریدیوم با استفاده از روش های Nested PCR (Nested polymerase chain reaction) و (RFLP) Restriction fragment length polymorphism در گوساله های شهرستان شاهرود

گونه­های کریپتوسپوریدیوم به شاخه اپی کمپلکس­ها تعلق دارد و پروتوزواهای فرصت طلبی هستند که سیستم­های تنفسی و گوارشی در انسان و حیوان­ها را آلوده می­کند. این مطالعه­ به­ منظور بررسی شیوع، تشخیص و شناسایی گونه­های کریپتوسپوریدیوم با استفاده از روش­های Nested PCR و (RFLP) Restriction Fragment Length Polymorphism در گوساله­های شهرستان شاهرود انجام شد. ۲۵۶ نمونه­ی مدفوع از گوساله­های زیر ۲ ماه جمع­آوری شد و نمونه­های مثبت با استفاده از روش زیل-نلسون رنگ آمیزی شدند. پرایمرهای اختصاصی برای بررسی Nested PCR استفاده شد و زیرگونه­ها توسط روش RFLP بررسی شدند. نتایج مطالعه میکروسکوپی نشان داد که ۲۷ نمونه (۵۴/۱۰ %) از نمونه­های مورد بررسی مثبت بودند. نتایج برای روش Nested PCR نشان داد که از مجموع نمونه­های مورد بررسی، به­ترتیب ۵۹/۹۲ % و ۴۱/۷ % به­ترتیب برای کریپتوسپوریدیوم پارووم و کریپتوسپوریدیوم اندرسونی مثبت بودند. نتایج نشان داد که ۲۵ نمونه تحت تاثیر آنزیم VSP در نواحی ۱۰۴ و ۶۲۸ جفت باز قرار گرفتند، که نشان دهنده­ی که تایید کننده­ی زیرگونه­های کریپتوسپوریدیوم پارووم گاوی و زیرگونه­ی ژن A بودند. نمونه­های تحت تاثیر آنزیم Ssp I قرار گرفتند و نتایج باندهایی را در ۳۸۵ و ۴۴۸ جفت باز نشان داد که نشان دهنده­ی زیر گونه­های C. muris/C. andersoni بودند. نتایج توسط آنزیم dde، باندهایی را در ۱۵۶، ۱۸۶ و ۲۲۴ جفت باز نشان داد که نشان دهنده­ی زیر گونه­ی C. muris بود. گونه­ها و زیرگونه­های مختلف با استفاده از روش­های مختلف شناسایی شدند که می­تواند به کنترل کریپتوسپوریدیوز کمک کند.

کلیدواژه ها:

کریپتوسپوریدیوز ، گوساله ها ، RFLP ، شاهرود