بهینه سازی بیان اگزوتوکسین A (دومین I,II)نوترکیب سودوموناس آئروژینوزا، تخلیص و ارزیابی آن در آزمایشگاه

زمینه و هدف: اگزوتوکسین A فاکتور مهم در بیماریزایی سودوموناس آئروژینوزا بوده و خنثی سازی آن در مبارزه با عفونتهای ناشی از آن کمک کننده خواهد بود. بنابراین در این مطالعه بهینه سازی تولید و تخلیص اگزوتوکسین A (دومین I,II) و ارزیابی اولیه آن بعنوان کاندید واکسن مورد بررسی قرار گرفنه است. مواد و روش کار: بعد از استخراج DNA  از سودوموناس آئروژینوزای سویه PAO۱ و تکثیر با PCR، قطعه ژنی مورد نظر با اتصال به ناقل Pet۲۲b به Escherichia coli BL۲۱ (E.coli) منتقل و بیان آن با روش SDS-Page بررسی گردید و پروتئین نوترکیب با روش افینیتی کروماتوگرافی تخلیص شد. واکنش آنتی ژنیک آن با آنتی بادی ضد اگزوتوکسین A و سرم بیماران مبتلا به عفونت سودوموناس آئروژینوزا با روش وسترن بلاتینگ بررسی گردید. یافته ها: بر اساس نتایج این مطالعه قطعه ژنی اگزوتوکسین A (دومین I,II) سودوموناس آئروژینوزا با اندازه bp ۱۲۱۲ در ژل الکتروفورزمحصول PCR مشاهده گردید که مقایسه توالی ژن کلون شده با توالی ژن اگزوتوکسین سودوموناس آئروژینوزای سویه PAO۱، صحت توالی را تایید کرد. بیان در E. coli BL۲۱ باعث تولید پروتئین مورد نظر با اندازه تقریبی  KD۴۵ گردید. بیان در شرایط مختلف نشان داد القای ۴ ساعت با نیم میلی مولارIPTG در دمایC˚ ۲۸ بهترین شرایط تولید پروتئین با غلظت بالا بود. نتایج نشان داد این پروتئین در وسترن بلاتینگ با آنتی بادی ضد اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزای و سرم بیماران مبتلا به عفونت سودوموناس بخوبی واکنش نشان داد. نتیجه گیری: سیستم استفاده شده سیستم مناسبی برای تولید اگزوتوکسین A (دومین I,II) نوترکیب است و می تواند برای تولید این پروتئین در مقیاس بالا مورد استفاده قرار گیرد. واژه های کلیدی: سودوموناس آئروژینوزا، کاندید واکسن، اگزوتوکسین A، واکسن نوترکیب

کلیدواژه ها:

Pseudomonas aeruginosa - vaccine candidate - exotoxin A-recombinant vaccine ، سودوموناس آئروژینوزا ، کاندید واکسن ، اگزوتوکسینA ، واکسن نوترکیب