جداسازی و همسانه سازی ژن Fom2 در گیاه طالبی

یکی از مهمترین مشکلات تولید طالبی در ایران، بیماری پژمردگی آوندی استکه عامل آن قارچ Fusarium oxysporum f.sp. melonis race 1 میباشد. تک ژن غالب Fom-2 باعث ایجاد مقاومت در برابر نژاد صفر و یکمیشود. در این پژوهش DNAژنومی ژنوتیپ ایزابل که مقاوم به این بیماری می باشد استخراج شد. به منظور انجام واکنش زنجیره ای پلیمراز، یک جفت آغازگر بر اساس توالی ژن Fom-2 بازیابی شده از بانک اطلاعات NCBI و با استفاده از نرم افزار Primer-3 طراحی گردید. در الگوی الکتروفورز محصول PCR تک باندی به اندازه مورد انتظار 1300 جفت باز مشاهده شد. قعطه تکثیرشده در ناقل pGEM-T Easy همسانه سازی شد و به باکتری E-Coli سویه DH5 منتقل گردید. کلونی های نوترکیب پس از رشد در محیط کشت انتخابی LB/AMP/X-Gal گزینش شدند و در محیط کشت LB مایع تکثیر یافتند. بمنظور تایید نهایی کلونینگ، از تعدادی از کلونی های نوترکیب، استخراج پلاسمید و برش با آنزیم برشی EcoR صورت گرفت و با مشاهده الگوی باندی، حضور ژن در ناقل، مورد تایید قرار گرفت. باکتری های دارای ناقل نوترکیب که درون محیط کشت LB مایع تکثیر یافته بودند، جهت انجام مطالعات بعدی از قبیل توالی یابی ژن و طراحی نشانگر برای شناسایی گیاهان حساس و مقاوم ذخیره گردیدند.

کلیدواژه ها:

کلیدی: طالبی ، پژمردگی آوندی ، ژن مقاومت ، همسانه سازی